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锐博生物常规siRNA  

2014-09-10 11:57:00|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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常规siRNA简介:

常规化学合成siRNA双链,特异性靶点设计,覆盖人、小鼠、大鼠全基因组的所有基因,适合进行各种细胞RNAi实验。

常规siRNA描述:

  -- 采用siCatch? siRNA design智能设计;

  -- 通过系统性优化,保证靶点特异性;

  -- 均经过严格的质谱检测,保证siRNA质量和纯度;

  锐博生物提供覆盖人全基因组所有基因的常规siRNA,您可以通过以下产品列表查找待研究基因的siRNA,其他物种的基因siRNA需定制。

常规siRNA实验数据:

常规化学合成siRNA多为19nt RNA + dTdT (3 悬垂)RNA双链分子,未经任何化学修饰。Sense:正义链,RNAAntisense:反义链,RNAdTdT:两端悬垂,DNA

针对人源EGFR基因的三对siRNANcontrol,以50nM终浓度转染A549细胞系,48小时后用qPCR方法检测siRNA沉默效果,结果表明siRNAmRNA水平沉默效果均达到70%72小时后用WB方法证实EGFR蛋白表达水平的显著降低。

常规siRNA使用方法:

为了降低细胞密度、试剂用量,转染效率等因素导致的孔间差异,保证实验的可靠性和可重复性,一般建议:

1)转染实验中每个转染样品至少设置3个复孔;

2)接种细胞时,每孔接种的细胞数量尽量保持一致,且细胞在各孔的表面平均分布。

1. 转染浓度:

siRNA 产品最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异。锐博生物推荐的 siRNA 初始转染浓度为 50nM,转染后检测时间为 24~72h。最佳转染效率一般通过设置时间曲线和浓度梯度进行优化,优化的范围建议为 5~100nM

2. 转染步骤:

riboFECT? CP Reagent 转染siRNA24孔板,转染浓度为50nM为例,其他规格容器的试剂用量。

1)接种细胞

a. 贴壁细胞:转染前一天,接种1×105细胞至含有适量完全培养基的24孔板培养孔中,使转染时的细胞密度能够达到50~80%。注:1)不同细胞生长速度不同,接种细胞的数量需要依据经验而定;2)每孔接种的细胞数量尽量相同,使细胞均匀分布于培养基表面。

b. 悬浮细胞:接种1×105~5×105个细胞至含有适量完全培养基的24孔板。

2)转染步骤对于每个转染样品,请按以下步骤准备:a. 稀释 siRNA:用 30μl 1X riboFECT?CP Bufferv1)稀释 1.25μl 20μM siRNA 储存液(v2),轻轻混匀,室温孵育 5minb. 混合液制备:加入 3μl riboFECT? CP Reagentv3),轻轻吹打混匀,室温孵育 015min。注:1)请不要振荡,溶液可能会有浑浊,但不会影响转染;2)混合液可室温放置一段时间,但不宜超过 24hc. riboFECT?CP 混合液加入到 465.75μl 细胞培养基(v4)中,轻轻混匀。注:混合液加入原细胞培养基,无需移除或更换。d. (可选)进行其他必要的特殊处理(如加药处理);e. 将培养板置于 37℃的 CO2培养箱中培养 24~96h(培养时间与实验目的相关)。

详情:http://www.ribobio.com/

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